Эффективность ПЦР-диагностики грибковых кератитов

Кератомикозы вызываются разными грибами. Для верификации диагноза используют микробиологические анализы (микроскопия мазка, посев на культуральные среды). Недостатки микробиологических методов: существенное снижение чувствительности под влиянием предыдущего лечения, длительность получения ответа (посев учитывают на 3–7-й день).

Цель. Оценить эффективность полимеразной цепной реакции (ПЦР) в диагностике кератомикозов в сравнении с культуральным методом.

Пациенты и методы. Наблюдения выполнены у семи пациентов с тяжелой тотальной язвой роговицы длительностью более 3 недель. Биоматериал (соскобы с язвы роговицы и фрагменты роговиц, удаленных при сквозной кератопластике) исследовали в ПЦР реального времени и микробиологическими методами. В ПЦР использовали диагностический набор для дифференциального выявления ДНК Candida albicans и суммарной ДНК грибов (Fungi), позволяющий обнаруживать большинство патогенных грибов без определения их вида. Микробиологические методы включали микроскопию мазков, окрашенных по Грамму и 1 % раствором метиленовой сини, посев на питательные среды, в том числе на селективную среду для грибов (агар Сабуро с хлорамфениколом).

Результаты. ПЦР: во фрагментах всех удаленных при кератопластике роговиц (6 пациентов) выявлена общая для грибов ДНК (ДНК Fungi) и не обнаружена ДНК Сandida albicans, что коррелировало с результатами посева на среду Сабуро (плесневые грибы обнаружены в 5 из 6 роговиц). В соскобах с роговиц, взятых до операции, также выявлена ДНК Fungi; однако рост грибов при посеве на различные питательные среды не был обнаружен.

Заключение. Грибковые язвы роговицы — тяжелое заболевание, нередко приводящее к инвалидизации по зрению. Быстрое определение этиологии и правильный выбор терапии определяют исходы заболевания. Преимущество ПЦР по сравнению с культуральным методом: быстрота получения результатов (4 часа вместо 3–7 дней); высокая чувствительность, позволяющая выявлять грибы не только в ткани удаленной роговицы, но и в соскобах с язвы роговицы больных, ранее получавших противогрибковую терапию. Наличие коммерческих наборов для дифференциального выявления общей для грибов ДНК и ДНК Сandida albicans расширяет возможности ПЦР при скрининговой диагностике грибковых кератитов и выборе препаратов до определения вида возбудителя. 

1. Jurkunas U., Behlau I., Colby K. Fungal keratitis: changing pathogens and risk factors. Cornea. 2009;28(6):638–643. DOI: 10.1097/ICO.0b013e318191695b

2. Farell S., VcElnea E., Moran S., Knowles S., Murphy C.C. Fungal keratitis in the Republic of Ireland. Eye. 2017;31:1427–1434. DOI: 10.1038/eye.2017.82

3. Скрябина Е.В., Астахов Ю.С., Коненкова Я.С., Касымов Ф.О., Зумбулидзе Н.Г., Варганова Т.С., Петухов В.П., Пиргунова А.А., Масян Я., Климко Н.Н., Богомолова Т.С., Десятик Е.А. Диагностика и лечение грибкового кератита. Часть I. Офтальмологические ведомости. 2018;11(3):63–73. DOI: 10.17816/OV11363-73

4. Keay L.J., Gower E.W., Lovieno A., Oechsler R.A., Alfonso E.C., Matoba A., Colby K., Tuli S.S., Hammersmith K., Cavanagh D., Lee S.M., Irvine J., Stulting R.D., Mauger T.F., Schein O.D. Clinical and microbiological characteristics of fungal keratitis in the United States, 2001–2007: a multicenter study. Ophthalmology. 2011 May;118(5):920–926. DOI: 10.1016/j.ophtha.2010.09.011

5. Делягин В.М., Мельникова М.Б., Першин Б.С., Серик Г.И., Джандарова Т.Т. Грибковое поражение глаз (диагностика, лечение). Практическая медицина. 2015;2(87):100–105.

6. Kaufmann C., Frueh B.E., Messerli J., Bernauer W., Thiel M.A. Contact lensassociated fusarium keratitis in Switzerland. Klin Monbl Augenheilkd. 2008 May;225(5):418–421. DOI: 10.1055/s-2008-1027357

7. Manikandan P., Abdel-Hadi A., Randhir Babu Singh Y., Revathi R., Anita R., Banawas S., Bin Dukhyil A.A., Alshehri B., Shobana C.S., Panneer Selvam K., Narendran V. Fungal Keratitis: Epidemiology, Rapid Detection, and Antifungal Susceptibilities of Fusarium and Aspergillus Isolates from Corneal Scrapings. Biomed Res Int. 2019 Jan 20; 2019:6395840. DOI: 10.1155/2019/6395840. eCollection 2019

8. Бельская К.И., Обрубов А.С. Некультуральные методы диагностики грибковых кератитов. РМЖ «Клиническая Офтальмология». 2018;1:37–41.

9. Mahmoudi S., Masoomi A., Ahmadikia K., Tabatabaei S.A., Soleimani M., Rezaie S., Ghahvechian H., Banafsheafshan A. Fungal keratitis: An overview of clinical and laboratory aspects. Mycoses. 2018 Dec;61(12):916–930. DOI: 10.1111/myc.12822

10. Полтанова Т.И., Белоусова Н.Ю. Рецидив грибкового кератита в роговичном трансплантате. Казанский медицинский журнал. 2018;99(1):148–150. DOI: 10.17816/KMJ2018-1485

11. Искендерли В.Б. Значимость этиологической структуры возбудителей в развитии и поддержании разных клинических форм офтальмомикозов. Биомедицина. 2018;2:10–12.

12. Maharana P.K., Sharma N., Nagpal R., Jhanji V., Das S., Vajpayee R.B. Recent advances in diagnosis and management of Mycotic Keratitis. Indian J Ophthalmol. 2016 May;64(5):346–357. DOI: 10.4103/0301-4738.185592

13. Embong Z., Wan Hitam W.H., Yean C.Y., Rashid N.H., Kamarudin B., Abidin S.K., Osman S., Zainuddin Z.F., Ravichandran M. Specific detection of fungal pathogen by 18S rRNA gene PCR in microbial keratitis. BMC Ophthalmol. 2008;29(8):7. DOI: 10.1186/1471-2415-8-7

14. Фоменко Н.В., Иванов М.К. Проблемы эффективного выявления возбудителей микозов слизистых урогенитального тракта. Новости «Вектор-Бест». 2012;4(66):2–7.